Técnica de hibridación Dot Blot en Streptococcus pneumoniae

En la técnica, la muesta se adhiere a una membrana de nitrocelulosa MCN a diferencia de Northern y Southern blot, en donde la muestra se transfiere a un gel.

1. En una concentración de 250 μg/mL, aplicar las muestras en la MCN bajo una presión al vacío

2.  Bloqueo de los sitios activos remanentes con SSTF y leche descremada al 3 % durante 30 min a 37 °C.

3. Después, tres lavados de 5 min con SSTF al 0,05 % en las tiras de MNC a  una  concentración  de  10  μg/mL,  durante  1h  a  temperatura  ambiente  o  30  min  a  37  ºC. 

4- Con DAB y H2O2 durante 10 min, cubrir las tiras de MCN.

Resultados: Las muestras portadoras se van a tipificar como puntos negros, a mayor cantidad de Psc19F del Streeptococcus, mayor intensidad negra

Link del video:   https://www.youtube.com/watch?v=uk7EtTQB1sQ

Referencia bibliográfica:

1. Cabrera O, Pisonero M MRB. Dot Blot to determine antigenic identity in conjugate vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 19F. VacciMonitor. 2017 Enero; 1(7). Disponible en : https://1library.co/document/eqoewo7y-determinar-identidad-antignica-vacunas-conjugadas-streptococcus-pneumoniae-serotipo.html