Técnica de hibridación Dot Blot en Streptococcus pneumoniae

En la técnica, la muesta se adhiere a una membrana de nitrocelulosa MCN a diferencia de Northern y Southern blot, en donde la muestra se transfiere a un gel.

1. En una concentración de 250 μg/mL, aplicar las muestras en la MCN bajo una presión al vacío

2.  Bloqueo de los sitios activos remanentes con SSTF y leche descremada al 3 % durante 30 min a 37 °C.

3. Después, tres lavados de 5 min con SSTF al 0,05 % en las tiras de MNC a  una  concentración  de  10  μg/mL,  durante  1h  a  temperatura  ambiente  o  30  min  a  37  ºC. 

4- Con DAB y H2O2 durante 10 min, cubrir las tiras de MCN.

Resultados: Las muestras portadoras se van a tipificar como puntos negros, a mayor cantidad de Psc19F del Streeptococcus, mayor intensidad negra

Link del video:   https://www.youtube.com/watch?v=uk7EtTQB1sQ

Referencia bibliográfica:

1. Cabrera O, Pisonero M MRB. Dot Blot to determine antigenic identity in conjugate vaccines against Streptococcus pneumoniae serotype 19F. VacciMonitor. 2017 Enero; 1(7). Disponible en : https://1library.co/document/eqoewo7y-determinar-identidad-antignica-vacunas-conjugadas-streptococcus-pneumoniae-serotipo.html

PCR en tiempo real para el Streptococcus pneumoniae

La amplificación por PCR es una herramienta indispensable con diversas aplicaciones dentro de la medicina. A menudo, se usa para probar la presencia de alelos específicos y para diagnosticar la presencia de una enfermedad directamente.

Desnaturalización: comienza calentando la reacción a aproximadamente 95 ° C, rompiendo los enlaces de hidrógeno que mantienen unidas las dos hebras de ADN molde.

Hibridación: se produce hibridación del cebador, es decir, el cebador se unirá a su secuencia complementaria en el ADN molde. Para ello es necesario bajar la temperatura a 40-68 °C durante 20-40 segundos

Extensión:  Etapa única que se lleva a cabo a una temperatura de 70-74 °C durante 5-15 minutos tras el último ciclo de PCR. Se asegura que cualquier ADN de cadena simple restante sea totalmente ampliado.

Imagen extraída de: https://pruebacoronavirus.com.mx/blog/como-se-realiza-la-prueba-diagnostica-pcr-en-tiempo-real-para-deteccion-de-covid-19/

Bibliografía:

1. Varacallo M, Mousa G. Biochemistry, Polymerase Chain Reaction. [Internet]: StatPearls;2021. [citado 22 de diciembre del 2021]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK535453/

2. Marimón JM. Métodos de diagnóstico rápido de las infecciones respiratorias. Elservier. 2017 Febrero; 35(5).https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7126338/

Tres pasos básicos para la extracción del ácido nucleico.

El test de ácido nucleico y su extracción va a depender de cuál sea la finalidad de los resultados, en donde generalmente vamos a encontrar 3 pasos básicos:
1- Lisis  de las células que contienen el material genético y otras moléculas de interés. 
2- Desnaturalización de la proteínas por proteasas utilizando mezclas como el  fenol o cloroformo 

3- Purificación de los ácidos nucleicos, mediante solventes orgánicos o por separación magnética  

Video extraído de: https://www.youtube.com/watch?v=aHO981sff-M

Bibliografía: 

Rajesh P, Ostermann E, Wei Q. Advances in point-of-care nucleic acid extraction technologies for rapid diagnosis of human and plant diseases.[Internet]:Biosens Bioelectron; 2020; 169:112592. [citado 14 de diciembre del 2021]. Disponible en : https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7476893/

  

Normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de Biología Celular y Molecular

Las tres normas básicas para ingresar al laboratorio  son:

1. Ingresar al laboratorio con el equipamiento necesario, es decir utilizando mandil, gafas, guantes e instrumentos de protección y utilizarlos hasta finalizar la práctica.
2. Está prohibido fumar, beber o comer en el laboratorio. 
3. Mantener la limpieza  del lugar y tener un buen aseo de manos al salir.

A continuación un vídeo que explicará todas las normas básicas que se deben emplear dentro del laboratorio:

Video sacado de:  https://www.youtube.com/watch?v=gJnJr-W8gmE     
Referencias Bibliográficas:

1.-Toaquiza A, Cayo M, Villamar F, Macías F. [sede web]. Manabí-Ecuador. Polo del conocimiento. 2018. [acceso el 6 de diciembre del 2021]. Disponible en: https://polodelconocimiento.com/ojs/index.php/es/article/view/1986

2-Romero M, Isacc M, Huacuja L,Ramos I,Ornelas M,Pérez G. Manual de Prácticas deLaboratorio de Bioquímica.3ra edición.España:McGraw Hill Medica. 2017. [Acceso el 6 de diciembre del 2021]. Disponible en: https://accessmedicina.mhmedical.com/book.aspx?bookid=1496

 

Bienvenida

Un saludo cordial y la más fraterna bienvenida a mi blog educativo, mismo que espero sea de gran utilidad para las personas que estén cursando la materia de Biología Molecular y Celular. Aquí se podrá observar información de relevancia de la cátedra que será impartido este nuevo semestre 2021-2022. Agradeciendo desde ya a la Dra. Amán, por los conocimientos que sé, me ayudarán a formarme como una gran profesional.

Agradezco en primer lugar a mis padres por su apoyo infinito en mi carrera, sé que sin ellos no sería lo hoy en día soy. Asimismo, a todos los doctores que han invertido tiempo en mi preparación como futura profesional de la salud. 

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